É uma mulher imprevisível e de carater forte. Ela não leva desaforo para casa. É nervosa, mas compreensiva e tem um bom coração. Mesmo com essa personalidade é tida como a maior ninja que já existiu, tendo um conhecimento medicinal invejável e uma força bruta incrível. Uma dos sannin, junto com Orochimaru e Jiraiya. É conhecida por muitos como "perdedora lendária" e é chamada de "Garota Lesma" (Namekuji Musume), por Akasuna Chiyo, que era uma antiga rival de tempos de guerra, se referindo à sua Kuchiyose (invocação), que invoca lesmas, tendo como principal uma chamada Katsuyu.
É a neta do Shodaime Hokage (Primeiro Hokage) de quem ganhou um colar de valor inestimável, que se fosse vendido poderia comprar mais de 3 montanhas. Foi treinada pelo Sandaime Hokage, Sarutobi, junto com Jiraiya e Orochimaru. Virou uma ninja médica, e sua força provém de sua habilidade de controle de chakra, podendo concentrar uma grande quantidade de chakra num só ponto e liberá-la toda de uma vez, causando grandes estragos. É tida como a maior kunoichi (ninja mulher) que Konoha já teve, virando um exemplo para muitas. Uma das suas admiradoras é TenTen.
Seu irmão, Nawaki, ainda genin, morreu em combate. Desde então ela defendeu a idéia de treinar um ninja médico para cada time ninja para diminuir o número de mortos. Numa missão no meio das grandes guerras, Dan, seu grande amor acabou morrendo. Ela não conseguiu salvá-lo, e culpando-se desenvolveu hemofobia (medo de sangue). Saiu do vilarejo por não suportar mais a dor de ter perdido as pessoas que mais amava, acompanhada por Shizune, a sobrinha de Dan, treinando-a neste meio tempo. Pode não parecer, mas Tsunade tem 50 anos quando primeiramente aparece na série. Ela se utiliza de um jutsu para manter sua aparência conforme ela quiser. Viciada em jogos de azar desde pequena, como pôquer, e máquinas de caça níqueis, ela tem como maior desvantagem o azar absurdo que a persegue, e é conhecida como Densetsu no Kamo (a perdedora lendária). Ela ganha grande quantidade de dinheiro eventualmente, mas isso geralmente é sinal de que algo ruim está pra acontecer.
Com a morte de Sarutobi, Jiraiya chegou com Uzumaki Naruto, propondo que ela viesse com ele para Konoha e se tornasse a Godaime Hokage (Quinta Hokage).Orochimaru, que havia sido muito danificado na luta contra seu antigo sensei, foi procurá-la para que ela curasse seus braços amaldiçoados, oferecendo reviver Dan e Nawaki. Depois de pensar muito e relembrar dos sonhos daqueles que ela amava, ela não aceita a proposta de Orochimaru, e é forçada a lutar contra ele e Yakushi Kabuto. Com a ajuda de Jiraiya e Uzumaki Naruto, consegue derrotar Kabuto e fazer com que Orochimaru fuja. Por causa dessa luta, é obrigada a usar um jutsu especial: com grande quantidade de chackra que ela acumulou e armazenou na testa, ela consegue regenerar qualquer parte do seu corpo. Porém Shizune acrescenta que a quantidade de vezes que uma célula pode se dividir é limitada, ou seja, estaria assim encurtando sua vida. Como Hokage, cuidou de Uchiha Sasuke, Hatake Kakashi,fez uma cirurgia arriscada em Rock Lee, permitindo que ele voltasse a sua vida de shinobi e conseguiu curar Choji Akimichi depois de ele comer a pílula vermelha, com a ajuda do conhecimento médico do clã Nara. Quando Sasuke foi atrás de Orochimaru e Naruto foi treinar com Jiraya, Haruno Sakura pediu para que Tsunade a treinasse, tendo como motivo o fato de não querer ser mais a inútil, aquela que sempre era protegida, ela gostaria de proteger e ajudar seus amigos também. Tsunade então, aceita treinar a jovem.
Dois anos e meio depois, Naruto volta para o vilarejo. Ela rapidamente manda a equipe de Hatake Kakashi, Uzumaki Naruto e Haruno Sakura, ajudados pelo time de Maito Gai, para resgatar o Kazekage que foi sequestrado pela Akatsuki. A missão tem sucesso, porém os conselheiros não gostam da decisão dela. Eles querem que ela deixe Naruto no vilarejo, já que nessa missão ele poderia ter caído na mão da Akatsuki. Tsunade diz que Naruto é um ninja valioso, que não vai perdê-lo. Ela se compromete com a segurança da vila, caso sua decisão tenha sido errada. Danzou é oposto a decisão dela, mas decide não falar nada. Para conseguir sua ambição, Danzou coloca Sai no lugar de Uchiha Sasuke. Tsunade sabe do passado de Sai, como ninja da ANBU Ne, e decide colocar Yamato para vigiá-lo.
Ao voltarem, Yamato conta para ela tudo o que aconteceu. Ao conversar com Sakura,Tsunade diz que com a ajuda de Kabuto, Sasuke deve ter usado algum tipo de droga, e com os ensinamentos de Orochimaru ele aprendeu kinjutsus. Fica sabendo que a Akatsuki se movimenta bastante. Percebe que logo eles devem ir atrás de Konoha, e que essa pode ser uma boa oportunidade para pará-los. Chega um monge do Templo do Fogo contando que a Akatsuki destruiu tudo lá. A Hokage pede a convocação dos vinte novos esquadrões, para que eles não saiam do país. Tsunade convoca 80 ninjas, divididos em grupo de 4 pessoas. A missão deles é parar os membros da Akatsuki de andarem no País do Fogo, matando-os, se necessário.Descobre depois que está na lista de assasinatos da akatsuki e descobre que seu perseguidor é o poderoso Hidan que se recuperou depois de sua luta com Shikamaru.
